Культурное своеобразие этого региона определялось сосуществованием двух разных цивилизаций – оседлой и кочевой, что нашло отражение в структуре экспозиции, включающей два основных раздела. Первый посвящен традиционной культуре таджиков и узбеков, которые по преимуществу являлись оседлыми земледельцами. Второй раздел характеризует культуру полукочевых народов региона – казахов, каракалпаков, киргизов и туркмен, которые освоили непригодные для земледелия зоны, главным образом занимаясь скотоводством.
Первый раздел посвящен традиционной городской культуре центрального района региона – территории Среднеазиатского Междуречья, создателями которой в равной степени являлись узбеки и таджики. В Бухаре, Самарканде, Хиве и других городах они составляли торгово-ремесленное население и имели много общего в обрядовой и повседневной жизни.
На экспозиции можно увидеть образцы традиционных кустарных тканей, медную посуду с тонким гравированным узором, расписную керамическую утварь, оригинальные ювелирные изделия, искусные вышивки шелком. Эти предметы экспонируются в обстановочных сценах, позволяющих показать контекст их бытования.
Одна из сцен воспроизводит обряд посвящения ученика ремесленного цеха в мастера. Глава цеха повязывал посвящаемому пояс – знак его нового статуса. В благодарность ученик преподносил учителю комплект одежды.
В экспозиции воссоздан традиционный интерьер парадной комнаты в городском доме. Здесь показан старинный обряд первого положения ребенка в колыбель, который сопровождался магическими действиями для обеспечения его здоровья и благополучия.
Уникальными экспонатами являются театральные куклы – перчаточные и марионетки, демонстрируемые в разделе, посвященном культуре городских зрелищ.
В специальном разделе показаны предметы, связанные с исламом – рукописное издание Корана на подставке, молитвенный коврик, нож для ритуала обрезания, сосуды для ритуального омовения. Особый комплекс составляет костюм и атрибуты дервишей, которые являлись приверженцами суфизма – мистико-аскетического течения в исламе.
Отдельная тема посвящена культуре полукочевых узбеков, традиционными занятиями которых являлось скотоводство и связанные с обработкой шерсти и кожи ремесла.
Раритетные экспонаты характеризуют своеобразие культуры горных таджиков и припамирских народов, которая долго сохраняла архаичные черты в условиях горной изоляции. Среди этих вещей – лепная керамическая посуда, деревянная утварь с резным орнаментом, кожаный надувной мешок для переправы через горные реки. Уникальны свадебные лицевые занавески горных таджичек, вышитые узоры которых включают древние магические символы.